食药物质中赭曲霉毒素B的测定高效液相色谱法

 

 

 

一、 适用范围

 

本文件描述了按照传统既是食品又是中药材的物质（简称食药物质）中赭曲霉毒素B的高效液相色谱-荧光检测方法。
本文件适用于石斛、栀子、莲子、百合、薏苡仁、茯苓和麦芽中赭曲霉毒素B含量的测定，附录A内其余食药物质可参考执行。

 

二、 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

 

 

三、 原理

 

采用乙腈提取液提取试样中的赭曲霉毒素B，分散固相萃取方法净化，高效液相色谱-荧光检测法检测，外标法定量。

 

四、 试剂和材料

 

除另有规定外，所用试剂应均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。

 

4.1试剂

 

4.1.1  乙腈（CH3CN）：色谱纯。

4.1.2  甲醇（CH3OH）：色谱纯。

4.1.3  甲酸（HCOOH）：色谱纯。

4.1.4  无水硫酸镁（MgSO4）。

4.1.5  氯化钠（NaCl）。

4.1.6  柠檬酸钠二水合物（C6H5Na3O7·2H2O）。

4.1.7  柠檬酸氢二钠盐倍半水合物（C6H9NaO8）。

4.1.8  石墨化碳黑（C，GCB），60~80μm。

4.1.9  N-丙基乙二胺（C5H14N2，PSA），40~60μm。

 

4.2盐析剂和吸附剂配比

 

4.2.1  盐析剂：无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠二水合物和柠檬酸氢二钠倍半水合物，质量比为4∶1∶1∶0.5。

4.2.2  吸附剂1：无水硫酸镁、石墨化碳黑和乙二胺基-N-丙基，质量比为3∶1∶1。

4.2.3  吸附剂2：无水硫酸镁、石墨化碳黑和乙二胺基-N-丙基，质量比为3∶1∶2。

 

4.3溶液配制

 

4.3.1  0.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸，用水稀释至1000mL，混匀。

4.3.2  2%甲酸乙腈溶液：取20mL甲酸，用乙腈稀释至1000mL，混匀。

4.3.3  乙腈-甲酸-水溶液(50：0.05：49.95，V/V/V)：量取500mL乙腈，加入0.5mL甲酸（4.1.3），用水稀释至1000mL，混匀。

 

4.4标准品

 

赭曲霉毒素B标准品（C20H19NO6，CAS：4825-86-9）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

 

4.5标准溶液配制

 

4.5.1  标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取一定量的赭曲霉毒素B标准品，用甲醇溶解成1mg/mL的标准储备液，-20°C下避光保存。

4.5.2  标准工作液（4.0μg/mL）：准确移取一定量赭曲霉毒素B标准储备液（4.5.1），用甲醇稀释成4μg/mL的标准工作液，4°C下避光保存。

4.5.3  基质标准工作液：准确移取一定量标准工作液（4.5.2），用基质空白溶液稀释成浓度为1、2、5、10、20、50ng/mL的基质标准工作液。

 

五、仪器和设备

 

5.1   高效液相色谱仪：配荧光检测器。

5.2   分析天平：感量分别为0.01g和0.00001g。

5.3   超声波发生器。

5.4   高速离心机：转速≥5000r/min。

5.5   恒温氮吹装置。

5.6   涡旋混合器。

5.7   粉碎机。

5.8   1mL一次性注射器。

5.9   滤膜：0.22μm，有机系。

5.10  离心管：50mL。

5.11  20目筛。

 

六、试样制备与保存

 

从样品中取出具有代表性的样品1kg，粉碎机粉碎混匀后过20目筛，装入洁净的自封袋中，密封，并标明标记，-20°C保存。

 

 

七、分析步骤

 

7.1提取与净化

 

T/CIQA50-20233称取20g试样（精确到0.01g），加入100mL2%甲酸乙腈（4.3.2），涡旋或振荡30s，超声波处理10min，8000r/min离心10min，将20mL上清液转移至另一离心管中，加入7.8g盐析剂（4.2.1），涡旋或振荡1min，8000r/min离心5min，分别按不同类型食药物质作如下处理。

 

7.1.1  石斛、栀子、莲子、百合、茯苓、麦芽的净化将10mL上清液转移至另一离心管中，再加入500mg吸附剂1（4.2.2），涡旋或振荡1min，8000r/min离心5min

 

7.1.2  薏苡仁的净化将10mL上清液转移至另一离心管中，再加入600mg吸附剂2（4.2.3），涡旋或振荡1min，8000r/min离心5min。分别取7.1.1和7.1.2中上清液5mL，在45°C条件下，用氮气吹干，加入1.0mL乙腈-甲酸-水溶液（4.3.3），涡旋或振荡1min溶解残留物，过0.22μm有机滤膜，收集滤液于进样瓶中，用高效液相色谱-荧光检测法测定。

 

7.2测定

 

7.2.1  液相色谱参考条件液相色谱参考条件列出如下：a)色谱柱：C18柱，（柱长150mm，柱内径4.6mm，填料粒径3.5μm）或等效柱；b)检测波长：激发波长320nm，发射波长456nm；c)流动相及洗脱条件：A：0.1%甲酸水，B：乙腈；等度洗脱：50%A-50%B；d)流速：1.0mL/min；e)柱温：40°C；f)进样量：10μL。

 

7.2.2  标准曲线的制作以标准工作溶液浓度为横坐标，待测物质的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。每次试验均应重新绘制标准工作曲线。

 

7.2.3  定性测定按照保留时间进行定性，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内。

 

7.2.4  定量测定按照7.2.1液相色谱条件测定样液和标准工作液，外标标准曲线法测定样品中的待测物质的含量，样品中待测物质的响应值应在标准曲线范围之内，如果超出标准曲线范围，应适当稀释后再进样。色谱图参见附录B。全国团体标准信息平台
T/CIQA50-20234

 

7.2.5  空白试验除不加试样外，均按7.1和7.2步骤进行。

 

 

 

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