葛根中黄酮类化合物的测定高效液相色谱-串联质谱法

发布时间：2023-05-04 11:22:16

 

 


一、 适用范围

 


范围本文件规定了葛根中黄酮类化合物的高效液相色谱-串联质谱的定量检测方法.本文件适用于野葛和粉葛中葛根素、３'-羟基葛根素、３'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、刺芒柄花苷、刺芒柄花黄素、异甘草素和鹰嘴豆芽素A等１１种黄酮类化合物含量的测定.

 


二、 规范性引用文件


规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法.

 

 

三、 术语和定义

 

 本文件没有需要界定的术语和定义

 

 

四、 原理

 


葛根样品中的黄酮类化合物用乙醇水溶液超声提取,采用高效液相色谱串联质谱仪测定,外标法定量.

 


五、试剂

 

非另有规定,所有试剂均为分析纯.

 

５.１试剂

 

５.１.１ 水:GB/T6682,一级.

 

５.１.２甲醇(CH４O):色谱纯.



５.１.３ 甲酸(CH2O2):色谱纯.

 

５.１.４ 乙醇(C２H６O):分析纯.

 

５.２试剂配制

 

５.２.１ 10％甲醇溶液:取10mL甲醇(５.１.２),加水(５.１.１)定容至100mL,混匀.

 

５.２.2 30％乙醇溶液:取30mL乙醇(５.１.４),加水(５.１.１)定容至100mL,混匀.

 

５.３ 标准黄酮类化合物标准品:相关信息见表１,纯度不低于98％.

 

５.４ 标准溶液配制

 

５４.１  黄酮类化合物标准储备液:准确称取11种(表１)待测物质的标准品,用甲醇(５.１.２)溶解后,加入10％甲醇溶液(５.２.１)定量稀释,制成高浓度单标准品储备液.分别移取一定量的11种单标准品储备液于25mL容量瓶,10％甲醇溶液(５.２.１)定容,制成１０mg/L的母液作为标准品储备液.避光-18°C以下保存,备用.

 

５.４.２  黄酮类化合物混合标准溶液:用10％甲醇溶液(５.２.１)对10mg/L的母液(５.４.１)稀释配成不同浓度的混合标准溶液用于绘制标准曲线.混合标准溶液应现用现配.

 

表１黄酮类化合物标准品基本信息表

 

六、仪器设备

 

 

６.１超高效液相色谱Ｇ串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI).

 

６.２电热鼓风干燥箱:温度50°C~330°C,功率3.1kW.

 

６.３超声波清洗器:超声输入功率200W.

 

６.４离心机:转速不低于7500r/min.

 

６.５超细水冷式粉碎机:细度20目~180目(0.85mm~0.09mm),功率2.5kW.

 

６.６天平:感量0.001g和0.0001g.

 

 

七、试样制备

 

 

７.１试样制备新鲜葛根经清洗去掉泥沙、去皮,用切片机切成２mm薄片后,放置于托盘中,于70°C烘箱中烘干至恒重.然后用分级超细水冷式粉碎机将葛根样品粉碎,全部装入洁净的容器中,立即检测.如果需要较长时间保存,将样品密封、标记后于－18°C以下保存.

 

７ư２试样提取称取葛根粉末0.5g(精确至0.0001g),置于50mL离心管中,加入25mL30％乙醇溶液(5.2.2),室温下超声提取45min.于7500r/min离心５min,将上清液转移至50mL容量瓶中.沉淀物再用30％乙醇溶液(5.2.2)洗涤２次,每次用量约５mL.在相同条件下离心５min,合并上清液,30％乙醇溶液(5.2.2)定容至50mL.上样前,采用0.22μm有机相滤膜过滤(5.5).

 

 

 

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