食药物质中T-2和HT-2毒素的测定液相色谱串联质谱法

发布时间：2023-05-09 14:20:04

 

 


一、 范围


本文件描述了按照传统既是食品又是中药材的物质（简称食药物质）中T-2毒素（T-2）和HT-2毒素（HT-2）的液相色谱串联质谱检测方法。


本文件适用于石斛、栀子、莲子、百合、薏苡仁、茯苓和麦芽中T-2毒素和HT-2毒素含量的测定，附录A内其余食药物质可参考执行。

 


二、 规范性引用文件

 

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

 

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

 

 

三、 原理


采用乙腈水溶液提取试样中T-2毒素和HT-2毒素，分散固相萃取方法净化，液相色谱串联质谱法检测，外标法定量。

 


四、试剂和材料

 

除另有规定外，所用试剂应均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。

 

4.1试剂

4.1.1  甲醇（CH3OH）：色谱纯。

 

4.1.2  乙腈（CH3CN）：色谱纯。

 

4.1.3  甲酸（HCOOH）：色谱纯。

 

4.1.4  乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。

 

4.1.5  氯化钠（NaCl）。

 

4.1.6  无水硫酸镁（MgSO4）。

 

4.1.7  二氧化硅（SiO2）。

 

4.1.8  N-丙基乙二胺（C5H14N2，PSA），40~60μm。

 

4.1.9  C18吸附剂，40~60μm。

 

4.1.10  石墨化碳黑（C，GCB），60~80μm。

 

4.2溶液配制

 

4.2.1  80%乙腈溶液：量取200mL水加入到800mL乙腈中，混匀。

 

4.2.2  1mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）：称取0.077g乙酸铵（4.1.4），加入1mL甲酸（4.1.3），用水溶解并稀释至1000mL，混匀。

 

4.2.3  甲醇-甲酸-水溶液（35︰0.5︰64.5，V/V/V）：量取350mL甲醇，加入5mL甲酸（4.1.3），用水稀释至1000mL，混匀。

 

4.3标准品

 

4.3.1  T-2标准品（C24H34O9，CAS：21259-20-1）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

 

4.3.2  HT-2标准品（C22H32O8，CAS：26934-87-2）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质

 

4.4标准溶液配制

 

4.4.1  标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取一定量的T-2毒素和HT-2毒素标准品，用乙腈溶解成1mg/mL的标准储备液，-20°C下避光保存。

 

4.4.2  标准工作液（1.0μg/mL）：分别准确移取一定量的T-2毒素和HT-2毒素标准储备液（4.4.1），用乙腈稀释成1μg/mL的标准工作液，4°C下避光保存。

 

4.4.3  混合标准工作溶液：分别准确移取一定量的T-2毒素和HT-2毒素标准工作液（4.4.2），用甲醇-甲酸-水溶液（4.2.3）稀释，将T-2配制成0.5、1、2、5、10、20ng/mL的混合标准工作液，将HT-2配制成2.5、5、10、25、50、100ng/mL的混合标准工作液。

 

4.4.4  基质混合标准工作溶液：分别准确移取一定量的T-2毒素和HT-2毒素标准工作液（4.4.2），用基质空白溶液稀释，将T-2配制成0.5、1、2、5、10、20ng/mL的混合标准工作液，将HT-2配制成2.5、5、10、25、50、100ng/mL的混合标准工作液。

 

 

五、仪器和设备

 

5.1  液相色谱三重四级杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

 

5.2  分析天平：感量分别为0.01g和0.00001g。

 

5.3  超声波发生器。

 

5.4  高速离心机：转速≥5000r/min。

 

5.5  恒温氮吹装置。

 

5.6  涡旋混合器。

 

5.7  粉碎机。

 

5.8  1mL一次性注射器。

 

5.9  滤膜：0.22μm，有机系。

 

5.10  离心管：50mL。

 

5.11  20目筛。

 

 

六、试样制备与保存

 

 

从样品中取出具有代表性的样品1kg，粉碎机粉碎混匀后过20目筛，装入洁净的自封袋中，密封，并标明标记，-20°C下保存。

 

 

七、分析步骤

 

7.1提取和净化

 

称取20g试样（精确到0.01g），加入4g氯化钠，再加入200mL80%乙腈（4.2.1），涡旋或振荡30s，超声波处理20min，使用高速离心机8000r/min离心5min，取100mL上清液用80%乙腈（4.2.1）定容至200mL后取10mL移至离心管中，分别按不同类型食药物质作如下处理。

 

7.1.1石斛、栀子、莲子、百合、薏苡仁、麦芽的净化向上清液中加入MgSO4240mg（4.1.6），SiO280mg（4.1.7），PSA80mg（4.1.8），C1880mg（4.1.9），GCB25mg（4.1.10），涡旋或振荡1min，8000r/min离心5min。

 

7.1.2茯苓的净化向上清液中加入MgSO4240mg（4.1.6），SiO280mg（4.1.7），PSA80mg（4.1.8），C1880mg（4.1.9），涡旋或振荡1min，8000r/min离心5min。分别取7.1.1和7.1.2中上清液5mL，在40°C条件下，用氮气吹干，加入1.0mL甲醇-甲酸-水溶液（4.2.3），涡旋30s溶解残留物，过0.22μm有机滤膜，收集滤液于进样瓶中，用液相色谱串联质谱法测定。

 

 

 

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