浆果类水果中花青苷的测定 高效液相色谱法
1、 范围
本文件规定了浆果类水果中花青苷测定的高效液相色谱法
本文件适用于浆果类水果中16种花青苷(附录A)的测定,
本文件测定的16种花青苷中,矮牵牛索-3-0-葡萄糖苷和芍药索-3-O-葡萄糖苷的线性范围为0.5mg/L~50mg/L,其余14种花青苷的线性范围为0.5mg/L~100mg/L;以试样称样量为1g.定容体积为50mL计,16种花青苷的检出限和定量限详见附录A。
2、 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款,其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3、 定义和术语
本文件没有需要界定的术语和定义。
4、 原理
浆果类水果中的花青苷经盐酸甲醇溶液振荡提取,经反相色谱柱分离,紫外一可见光检测器或二极管阵列检测器检测,以保留时间定性,外标法定量。
5、试剂和材料
5.1 除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯:水为GB/T6682规定的一级水,
5.2 甲醇(CH,OH).
5.3 甲酸(HCOOH):色谱纯
5.4 盐酸(HC):36%~38%,
5.5 乙腈(CH,CN):色谱纯
5.6 盐酸甲醇溶液:6mL盐酸(5.4)和194mL甲醇(5.2)混匀,
5.7 提取剂:50mL盐酸甲醇溶液(5.6)和450mL甲醇(5.2)混匀.
5.8 流动相A:50mL甲酸(5.3),用超纯水定容至1000mL,
5.9 流动相B:1000mL乙腈(5.5)
5.10 标准品:纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质,相关信息见附录A
5.11 单标储备溶液:准确称取5.0mg.用提取剂(5.7)溶解并定容至5mL:即为1000mg/L的单标储备液,于一18储存于密闭棕色玻璃瓶中,有效期6个月。
5.12 混合标准工作液:将单标储备溶液混合后.用提取剂(5.7)作为溶剂,逐级稀释成0.5mg/L。
5.12 微孔滤膜:0.45μm:有机相:
6、仪器和设备
6.1 高效液相色谱仪:配有紫外-可见光检测器或二极管阵列检测器。
6.2 分析天平:感量为0.01g和0.0001g:
6.3 摇床:温度可控:转速200 r/min.
6.4 离心机:转速不低于5000r/min:
6.5 冷冻研磨机:转速25 000r/min.
7、仪器和设备
7.1 试样制备
果实洗净,捩干,取可食部分200g,切碎混匀,用冷冻研磨机研成粉末。
7.2 试样保存
试样装人样品瓶中,密封,置一80条件下冷冻保存。
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