农产品及其制品中嘌呤的测定高效液相色谱法_标准物质检测_玺标标准物质中心

 

 

 

 

1、 范围

 

本文件规定了农产品及其制品中嘌呤的高效液相色谱测定方法.本文件适用于农产品及其制品中嘌呤(次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤和腺嘌呤)含量的测定.

 

2、 规范性引用文件

 

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.

GB/T６６８２分析实验室用水规格和试验方法

 

 

3、 定义和术语

 

本文件没有需要界定的术语和定义。

 

 

4、 原理

 

嘌呤化合物在高温条件下经三氟乙酸甲酸溶液水解形成游离态嘌呤,经反相色谱柱分离,紫外检测器或二极管阵列检测器检测,保留时间定性,外标法定量.

 

5、试剂和材料

 

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T６６８２规定的一级水.

 

５.１试剂

 

５.１.１氢氧化钠(NaOH).

 

５.１.２三氟乙酸(CF3COOH).

 

５.１.３甲酸(HCOOH).

 

５.１.４磷酸(H３PO４).

 

５.１.５磷酸二氢钾(KH２PO４):优级纯.

 

５.１.６甲醇(CH３OH):色谱纯.

 

５.２溶液配制

 

５.２.１10mmol/L氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠(５.１.１)０.０４g,用水溶解并定容至１００mL,混匀.

 

５.２.２试样提取溶液:量取三氟乙酸(５.１.２)４５mL,甲酸(５.１.３)４５mL,加水定容至１００mL,混匀.

 

５.２.３10％磷酸溶液:取磷酸(５.１.４)１０mL,用水稀释定容至１００mL,混匀.

 

５.２.４５mmol/L磷酸二氢钾溶液(pH３.８):称取磷酸二氢钾(５.１.５)０.９５２g,加水９００mL溶解,加水定容至１L,混匀,用磷酸溶液(５.２.３)调节pH至３.８.

 

５.３标准品

 

５.３.１次黄嘌呤(C５H４N４O,CAS号:６８Ｇ９４Ｇ０):纯度≥９８％,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.

 

５.３.２黄嘌呤(C５H４N４O２,CAS号:６９Ｇ８９Ｇ６):纯度≥９８％,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.

 

５.３.３鸟嘌呤(C５H５N５O,CAS号:７３Ｇ４０Ｇ５):纯度≥９８％,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.

 

５.３.４腺嘌呤(C５H５N５,CAS号:７３Ｇ２４Ｇ５):纯度≥９８％,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.

 

５.４标准溶液配制

 

５.４.１嘌呤混合标准储备溶液:分别准确称取次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤各１０mg(精确至０.０１mg)于烧杯中,用１０mmol/L的氢氧化钠溶液(５.２.１)溶解并转移至１００mL容量瓶,定容,即为１００μg/mL的嘌呤混合标准储备溶液,标准储备溶液于４°C保存,不超过６个月.

 

５.４.２嘌呤混合标准工作溶液:量取嘌呤混合标准储备溶液１mL用磷酸二氢钾溶液(５.２.４)稀释定容至１０mL后,分别量取０.１mL、０.２mL、０.５mL、１mL、５mL、１０mL,用磷酸二氢钾溶液(５.２.４)稀释定容至１０mL,即得到浓度分别为０.１μg/mL、０.２μg/mL、０.５μg/mL、１μg/mL、５μg/mL、１０μg/mL的嘌呤混合标准工作液,或根据需要配制其他浓度,现用现配.

 

５.５材料

 

微孔滤膜:水相滤膜或尼龙滤膜,０.４５μm.

 

6、仪器和设备